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PCR實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)
PCR實(shí)驗(yàn)室主要實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目:病毒檢測(cè),乙型肝炎,禽疫病,癌基因的檢測(cè)和診斷,DNA指紋,個(gè)體識(shí)別,親子鑒定及法醫(yī)物證等等。
PCR實(shí)驗(yàn)室建設(shè)原則上分為四個(gè)單獨(dú)的工作區(qū)域:試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)、標(biāo)本制備區(qū)、擴(kuò)增反應(yīng)混合物配制和擴(kuò)增區(qū)、擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)。
1、試劑準(zhǔn)備區(qū):用于試驗(yàn)試劑的準(zhǔn)備。
該區(qū)域?yàn)檎龎?,目的是防止污染物質(zhì)溢入。該區(qū)域內(nèi)部又可分為3個(gè)區(qū)域:普通提取試劑的準(zhǔn)備區(qū)、PCR試劑準(zhǔn)備區(qū)和PCR主反應(yīng)液準(zhǔn)備區(qū)。在普通提取試劑的準(zhǔn)備區(qū)內(nèi)準(zhǔn)備一些樣品核酸提取時(shí)所需的裂解液、提取液等;PCR試劑準(zhǔn)備區(qū)用于PCR試劑的制備和保存。例如準(zhǔn)備引物、探針等PCR試劑。為了防止交叉污染,避免反復(fù)冷凍和解凍,試劑存貯溶液應(yīng)該被平均為小的工作體積,儲(chǔ)存在這個(gè)房間以備后用:PCR主反應(yīng)液準(zhǔn)備區(qū)將進(jìn)行主反應(yīng)混合液(除了樣品。所有PCR所需試劑的混合)添加到PCR管的操作。重要提示:不能將其它房間的材料(包括擴(kuò)增、模板和目標(biāo)核酸或陽(yáng)性對(duì)照、供應(yīng)品、或設(shè)備)帶進(jìn)試劑準(zhǔn)備區(qū)。
2、樣品準(zhǔn)備區(qū):該區(qū)域無(wú)壓力設(shè)置要求。
該區(qū)域是用于對(duì)樣品進(jìn)行分樣,將樣品進(jìn)行研磨、粉碎、勻漿的區(qū)域。由于在這些粉碎、研磨和勻漿處理過(guò)程中會(huì)產(chǎn)生氣溶膠,因此,存在陽(yáng)性樣品污染后續(xù)操作的可能性。該區(qū)域與后面的區(qū)域應(yīng)嚴(yán)格隔離,應(yīng)放在與后面的三個(gè)區(qū)域隔開(kāi)的獨(dú)立的房間中。在樣品準(zhǔn)備區(qū)內(nèi)還可設(shè)立一個(gè)專用的封閉區(qū)或房間用于樣品的接收和儲(chǔ)存。這個(gè)房間可以放置冰箱用于樣品儲(chǔ)存,應(yīng)該和樣品準(zhǔn)備區(qū)其它區(qū)域隔離開(kāi)。樣品準(zhǔn)備區(qū)域的人員不得進(jìn)入試劑準(zhǔn)備區(qū)。
3、核酸提取區(qū):核酸提取區(qū)是進(jìn)行樣品核酸提取的區(qū)域。
該區(qū)域?yàn)樨?fù)壓,目的是防止核酸溢出造成污染。樣品準(zhǔn)備區(qū)又包括從樣品中進(jìn)行核酸提取和純化的區(qū)域以及將核酸加到包含PCR主反應(yīng)混合液管中的操作區(qū)域。添加完樣品后,PCR管的蓋子要盡可能快地蓋好。使用PCR板和膠蓋時(shí),陽(yáng)性對(duì)照和含目標(biāo)序列的樣品要與待測(cè)樣本分開(kāi)操作,以避免模板添加時(shí)造成交叉污染
重要提示:這個(gè)房間里的一切物品不得帶人試劑準(zhǔn)備區(qū)。
4、擴(kuò)增和產(chǎn)品檢測(cè)區(qū):該區(qū)域是用來(lái)進(jìn)行PCR擴(kuò)增和PCR分析。
PER儀放置在這個(gè)區(qū)域。房間保持負(fù)壓,目的是防止核酸溢出。在該區(qū)域人員一定要一直穿戴工作服和手套,在離開(kāi)房間前脫去,防止擴(kuò)增子污染其它地點(diǎn)。所有用于擴(kuò)增和產(chǎn)品檢測(cè)的設(shè)備要指定用于這個(gè)房間。PCR分析]二作也設(shè)置在該區(qū)域,例如:酶切、測(cè)序、克隆等,但實(shí)驗(yàn)室應(yīng)盡可能把這些活動(dòng)分隔在不同區(qū)域或不同房間。以降低擴(kuò)增產(chǎn)物的污染風(fēng)險(xiǎn)。如果沒(méi)有條件在該區(qū)域設(shè)立負(fù)壓,此區(qū)域必須建立排風(fēng)裝置。
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PCR實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)必須設(shè)計(jì)走廊嗎?
實(shí)驗(yàn)室建設(shè)網(wǎng)
PCR實(shí)驗(yàn)室又稱為基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室,是一種分子生物學(xué)技術(shù),用于放大特定的DNA片段,可看作生物體外的特殊DNA復(fù)制。通過(guò)DNA基因追蹤系統(tǒng),能迅速掌握患者體內(nèi)的病毒含量,其精確度高達(dá)納米級(jí)別,精確檢測(cè)乙肝病毒在患者體內(nèi)存在的數(shù)量、是否復(fù)制、是否傳染、傳染性有多強(qiáng)、是否必要服藥、肝功能有否異常改變能及時(shí)判斷病人最適合使用哪類抗病毒藥物、判斷藥物療效如何、給臨床治療提供了可靠的檢驗(yàn)依據(jù)。
PCR實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)
一、PCR實(shí)驗(yàn)室基本結(jié)構(gòu)
PCR實(shí)驗(yàn)室基本由四大結(jié)構(gòu)組成,常見(jiàn)為:試劑準(zhǔn)備區(qū)、制備區(qū)、擴(kuò)增區(qū)和擴(kuò)增分析區(qū)。
二、基本功能介紹:
1、準(zhǔn)備區(qū):主要進(jìn)行實(shí)驗(yàn)所需試劑的準(zhǔn)備工作,分裝等,由傳遞窗運(yùn)送至制備區(qū),嚴(yán)禁走人員通道。
2、制備區(qū):主要進(jìn)行樣品等保存,DNA/RNA的提取、貯存和其加入至擴(kuò)增反應(yīng)管和測(cè)定DNA/RNA的合成。
3、擴(kuò)增區(qū):主要進(jìn)行DNA的擴(kuò)增,已制備的DNA模版和合成的cDNA的加入和主板反應(yīng)混合液制備成反應(yīng)混合液等也可在擴(kuò)增區(qū)內(nèi)進(jìn)行,在巢式PCR測(cè)定中,通常在首次擴(kuò)增后必須打開(kāi)反應(yīng)管,因此巢式擴(kuò)增有較高等污染危害性,二次加樣必須在本區(qū)完成。
4、擴(kuò)增分析:主要用來(lái)做擴(kuò)增產(chǎn)物的測(cè)定,本區(qū)是主要的擴(kuò)增產(chǎn)物污染來(lái)源,因此必須主意避免通過(guò)本區(qū)的物品或者工作服將擴(kuò)增產(chǎn)物帶出。
三、PCR實(shí)驗(yàn)室的走廊、傳遞窗設(shè)計(jì)常識(shí)
1. PCR走廊:并不是標(biāo)配,進(jìn)深不夠時(shí)不要做PCR走廊,且PCR走廊會(huì)增加交叉污染。
這4個(gè)分區(qū)(試劑儲(chǔ)存和準(zhǔn)備區(qū)、標(biāo)本制備區(qū)、核算擴(kuò)增區(qū)、產(chǎn)物分析區(qū))原本就不需連接在一起。且在物理空間上必須是完全相互獨(dú)立的,各區(qū)域無(wú)論在空間上還是在使用中,應(yīng)當(dāng)始終處于完全的分隔狀態(tài),不能有空氣的直接相通。
2. 傳遞窗:并非必須設(shè)置(只要不涉及潔/污分流就不需要設(shè)置傳遞窗),但一般實(shí)驗(yàn)機(jī)構(gòu)/實(shí)驗(yàn)人員喜歡設(shè)置。
傳遞窗的本質(zhì)同緩沖間,是物流的緩沖間。在PCRclass="wpcom_keyword_link"實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)中,試劑準(zhǔn)備和標(biāo)本制備間是重點(diǎn)保護(hù)的區(qū)域,此處最好不要加傳遞窗,防止交叉污染。實(shí)驗(yàn)中的污染風(fēng)險(xiǎn)主要來(lái)自于核酸擴(kuò)增時(shí)的加樣行為,但由于操作在生物安全柜內(nèi)進(jìn)行,且確保空氣不外溢,因此不存在污染。
中國(guó)生物建設(shè)的新冠疫苗P3實(shí)驗(yàn)室和P3生產(chǎn)車間進(jìn)展順利
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