微生物實(shí)驗(yàn)室的常用儀器設(shè)備及使用的注意事項(xiàng)

4月26日，國家衛(wèi)生委員會召開全國視頻會議，明確提出所有縣區(qū)級以上疾病對策機(jī)構(gòu)、二級以上綜合醫(yī)院應(yīng)緊急改造，在短時(shí)間內(nèi)形成核酸檢測能力。

各地公立機(jī)構(gòu)的檢驗(yàn)?zāi)芰Σ荒軡M足需求只是暫時(shí)的，獨(dú)立醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室在充實(shí)檢驗(yàn)?zāi)芰Φ耐瑫r(shí)，發(fā)揮自己豐富的檢驗(yàn)管理運(yùn)營理念，以及地區(qū)化壟斷的經(jīng)驗(yàn)優(yōu)勢，融入國家隊(duì)核酸檢驗(yàn)?zāi)芰Φ慕ㄔO(shè)

隨著各地建立pcr實(shí)驗(yàn)室，本文從硬件基礎(chǔ)的角度整理了PCR實(shí)驗(yàn)室建設(shè)的幾個(gè)要點(diǎn)，獨(dú)立醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室運(yùn)用豐富的運(yùn)營經(jīng)驗(yàn)，建設(shè)指導(dǎo)

本平臺對接多家獨(dú)立醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室，提供不同ICL機(jī)構(gòu)PCR實(shí)驗(yàn)室建設(shè)的相關(guān)優(yōu)勢，可以進(jìn)行PCR實(shí)驗(yàn)室建設(shè)的需求咨詢，歡迎后臺小編(微信號:yourivd))
 

如何建設(shè)PCR實(shí)驗(yàn)室

以下是PCR實(shí)驗(yàn)室建設(shè)過程中的幾個(gè)重要控制點(diǎn)，根據(jù)實(shí)驗(yàn)室的具體情況制作質(zhì)量系統(tǒng)，制作《質(zhì)量手冊》、《程序文件》、《作業(yè)指導(dǎo)書》，保證管理系統(tǒng)的運(yùn)行效果。

管理系統(tǒng)的特點(diǎn)是明確的目的、規(guī)范的管理、有效的制約、高效的機(jī)制、能夠自我發(fā)展的整體。

建立完善的SOP文件，規(guī)定完成各種質(zhì)量活動(dòng)的方法，各SOP應(yīng)對一組相互關(guān)系的活動(dòng)進(jìn)行說明。

每個(gè)SOP文件都應(yīng)該說明這個(gè)質(zhì)量各個(gè)環(huán)節(jié)的輸入、轉(zhuǎn)換和輸出所需要的文件、物資、人員、記錄以及與相關(guān)活動(dòng)的界面關(guān)系。

明確各環(huán)節(jié)轉(zhuǎn)換過程中各要素的要求，即誰做、什么、什么程序、達(dá)到什么要求、如何控制、形成什么記錄和報(bào)告以及相應(yīng)的審查手續(xù)。

規(guī)定在質(zhì)量活動(dòng)中需要注意的例外或特殊情況的糾正措施。SOP應(yīng)簡潔明了，易于理解，員工應(yīng)熟練掌握和嚴(yán)格遵守。

02PCR實(shí)驗(yàn)室關(guān)設(shè)置

完成一組PCR實(shí)驗(yàn)，通常需要經(jīng)過試劑配制、樣品處理、核酸擴(kuò)張和產(chǎn)品分析四個(gè)實(shí)驗(yàn)過程。

這四個(gè)實(shí)驗(yàn)過程的實(shí)驗(yàn)室應(yīng)相鄰配置，構(gòu)成獨(dú)立的PCR實(shí)驗(yàn)區(qū)。標(biāo)準(zhǔn)的PCR實(shí)驗(yàn)區(qū)包括試劑準(zhǔn)備區(qū)、標(biāo)本準(zhǔn)備區(qū)、擴(kuò)展區(qū)、產(chǎn)物分析區(qū)、各區(qū)輔助緩沖區(qū)和公共走廊。

pCR實(shí)驗(yàn)室整體平面布局

某醫(yī)院PCR實(shí)驗(yàn)室平面布局如圖1所示，整個(gè)區(qū)域都有公共走廊，每個(gè)獨(dú)立實(shí)驗(yàn)區(qū)都有專門的緩沖區(qū)。通過壓差控制，在PCR實(shí)驗(yàn)中試劑和標(biāo)本不受氣溶膠污染，減少擴(kuò)大產(chǎn)品對人員和環(huán)境的污染。

圖表1、某醫(yī)院PCR實(shí)驗(yàn)室平面圖

試劑準(zhǔn)備區(qū)

這個(gè)實(shí)驗(yàn)區(qū)主要進(jìn)行的操作是儲存試劑的制備、試劑的分裝和主反應(yīng)合液的制備。

試劑和用于標(biāo)本制作的材料應(yīng)直接運(yùn)輸?shù)皆搮^(qū)域，不得通過其他區(qū)域。試劑原材料必須儲存在本區(qū)，并在本區(qū)制備必要的儲存試劑。

試劑準(zhǔn)備區(qū)配備2~8°C冰箱和-80°C冰箱，計(jì)算冷負(fù)荷時(shí)，需要計(jì)算。

房間面積應(yīng)控制在15m2~20m2。本區(qū)壓力梯度要求為：相對正壓狀態(tài)，防止外界含核酸氣溶膠的空氣進(jìn)入，造成污染。

標(biāo)本制備區(qū)

這個(gè)區(qū)域主要進(jìn)行的操作是臨床標(biāo)本的保存、核酸(RNA、DNA)的提取、保存、增加反應(yīng)管和測定RNA時(shí)的cDNA的合成。

標(biāo)本制備區(qū)配備2~8°C冰箱和-20°C冰箱，計(jì)算冷負(fù)荷時(shí)需要計(jì)算。在標(biāo)本制備區(qū)域，還需要配備生物安全柜來提取核酸。

微生物實(shí)驗(yàn)室區(qū)分及要求

為了避免提取的核酸在柜內(nèi)反復(fù)循環(huán)，造成標(biāo)本之間的交叉污染，出現(xiàn)假陽性的結(jié)果，該區(qū)域配備的生物安全柜必須為B2型。生物安全柜工作區(qū)域的垂直氣流均來自實(shí)驗(yàn)室，排氣經(jīng)高效過濾器過濾后直接排到室外，不得返回安全柜和實(shí)驗(yàn)室。

根據(jù)經(jīng)驗(yàn)，在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)設(shè)置生物安全柜時(shí)，每臺設(shè)置一臺，實(shí)驗(yàn)室面積增加10m2的標(biāo)本制備區(qū)域的面積應(yīng)在25m2~30m2之間。本區(qū)壓力梯度要求為：相對于鄰近區(qū)為正壓，避免從鄰近區(qū)進(jìn)入本區(qū)的氣溶膠污染。

擴(kuò)展室

這個(gè)區(qū)域主要進(jìn)行的操作是DNA或cDNA擴(kuò)展。另外，制備的DNA模板和合成的cDNA(來自樣品制備區(qū))的加入和主反應(yīng)混合液(來自試劑的貯藏和制備區(qū))制備的反應(yīng)混合液等也可以在本區(qū)內(nèi)進(jìn)行。

在巢式PCR測量中，通常在第一次擴(kuò)張后必須打開反應(yīng)管，因此巢式擴(kuò)張具有較高的污染危險(xiǎn)性，第二次加樣必須在本區(qū)內(nèi)進(jìn)行。

展室主要配備PCR實(shí)驗(yàn)室的核心儀器PCR儀，本文實(shí)例使用ABI7500和ABI9700兩種PCR儀。

在實(shí)驗(yàn)室建設(shè)過程中，需要為PCR儀配備專用的UPS電源，保證其正常工作。該區(qū)域的面積控制在15m2~20m2。

本區(qū)的壓力梯度要求為:相對于相鄰區(qū)域?yàn)樨?fù)壓，以免氣溶膠從本區(qū)泄漏。為了避免氣溶膠造成的污染，應(yīng)盡量減少本區(qū)內(nèi)不必要的行走。個(gè)別操作，如樣品，應(yīng)在超凈臺內(nèi)進(jìn)行。建議采用5~10Pa壓差，在控制方面比較容易實(shí)現(xiàn)。

產(chǎn)物分析區(qū)域

該區(qū)域主要進(jìn)行的操作是擴(kuò)展片段的測定。如果使用全自動(dòng)封閉分析儀器進(jìn)行檢測，則該區(qū)域不設(shè)置。

在室內(nèi)設(shè)置通風(fēng)柜，保證室內(nèi)相對負(fù)壓，空氣從室外流向室內(nèi)。該區(qū)域面積控制在15m-20m。

本區(qū)域是最主要的擴(kuò)展產(chǎn)品污染源，因此本區(qū)域的壓力梯度要求為:相對于鄰區(qū)域?yàn)樨?fù)壓，避免擴(kuò)展產(chǎn)品從本區(qū)域擴(kuò)展到其他區(qū)域。建議采用5~10Pa壓差，在控制方面比較容易實(shí)現(xiàn)。

正負(fù)壓區(qū)緩沖室安裝

根據(jù)壓力梯度的要求，試劑配制室和樣品處理室相對正壓，擴(kuò)展室和產(chǎn)物分析室相對負(fù)壓，要求正壓區(qū)和負(fù)壓區(qū)緩沖室的壓力設(shè)計(jì)大不相同。

正壓緩沖室符合一般正壓潔凈室的緩沖原則，主要是防止室外環(huán)境空氣中的氣溶膠進(jìn)入室內(nèi)。正壓緩沖室的布置如圖2所示。

正壓緩沖室布局圖

負(fù)壓緩沖室要求緩沖室對核酸擴(kuò)展室和產(chǎn)物分析區(qū)保持正壓，緩沖室外也保持正壓(主要滿足室內(nèi)凈化需求，如果室內(nèi)沒有清潔要求，可以作為0壓)。負(fù)壓緩沖室的布置如圖3所示。